1. 产品概述：NP-40是一种很温和的非离子型去垢剂，适用于膜蛋白非变性条件下的溶解，可用于动物、植物、真菌和细菌等样品的裂解。裂解后的蛋白样品可用于PAGE、WB、IP、co-IP和ELISA等相关实验。本产品主要有效成分为0.5% NP-40。

2. 使用方法：使用前请将本产品在室温下彻底融解，充分混匀后置于冰上预冷。取适量本产品，根据实验需要，在数分钟内加入蛋白酶、磷酸酶、蛋白激酶等相关抑制剂混合物，并充分混匀。

① 对于贴壁细胞：

1. 去除培养液，用预冷的PBS、生理盐水或无血清培养液清洗细胞1次。洗去血清中的IgG干扰对IP和Co-IP实验有益，但对WB可能并非必要；若培养液中无实验相关的干扰因素，可不清洗。

2. 弃去培养液，根据实验需要，加入适量预冷的NP-40裂解液于冰上裂解。推荐每10 cm2底面积使用150-250μL NP-40裂解液。期间轻轻摇晃数次以确保裂解液与细胞充分接触。

注：动物细胞通常在接触裂解液2-3秒后即可观察到细胞裂解；植物细胞宜在冰上裂解10-15分钟，直至充分裂解。

3. 充分裂解后，4℃、12,000 g离心10分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、WB、IP、co-IP等相关实验。

② 对于悬浮细胞：

1. 500 g离心5分钟收集细胞，弃上清。轻轻涡旋或轻弹管底使细胞尽量散开。若有必要可用预冷的PBS、生理盐水或无血清培养液洗1遍后再进行离心。

2. 按照6孔板每孔加入150-250 μL裂解液的比例加入预冷的NP-40 裂解液，轻弹管底以充分裂解细胞，此时应无明显的细胞沉淀。若细胞量较多，建议将样品分装后再裂解（0.5-5 ×106 cells/管）。

3. 充分裂解后，4℃、12,000 g离心10分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、WB、IP、co-IP等相关实验。

③. 对于细菌或酵母细胞：

为达到更好的裂解效果，细菌和酵母可先分别使用溶菌酶和破壁酶消化后再使用NP-40 裂解液进行裂解。

1. 取1 mL菌液或酵母液，轻轻涡旋或轻弹管底使细菌或酵母细胞尽量散开。

2. 加入100-200 μL NP-40 裂解液，轻弹管底以充分裂解细胞，在冰上裂解2-10分钟。

3. 充分裂解后，4℃、12,000 g离心10分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、WB、IP、co-IP等相关实验。

④ 对于组织样品：

1. 将待裂解组织置于小皿中，在冰上操作，剪切成细小的碎片。也可将组织样品冷冻后使用液氮充分研磨后再加入NP-40 裂解液进行裂解。

2. 每20 mg组织样品加入150-250 μL裂解液的比例加入预冷的NP-40 裂解液。若裂解不充分可适当增加裂解液的用量；若需高浓度的蛋白样品，可适当减少裂解液的用量。

3. 使用玻璃匀浆器匀浆。

4. 充分裂解后，4℃、12,000 g离心10分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、WB、IP、co-IP等相关实验。

3. 存储条件： 长期储存在-20ºC，可保存1年；短期储存在4ºC，可保存1个月。

4. 注意事项：

1. 尽量避免反复冻融，可适当分装后冻存使用。

2. 所有裂解步骤在冰上或4ºC进行效果更佳。

3. 该试剂盒不包含蛋白酶、磷酸酶、蛋白激酶等相关抑制剂。

4. 裂解液用量根据不同细胞的需要不同。

5. 建议通过预实验以找到最佳裂解条件。

6. 本产品含有较高浓度的去垢剂，蛋白浓度测定不宜用Bradford法，建议使用BCA法。

7. 本产品仅限于专业人员的科学研究用途，不得用于临床诊断或治疗，也不得用于食品或药品。

8. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套进行操作。