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10×Western转膜液

产品编号:A0181
英文名:Western Transfer Buffer (10×)
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本网站销售的产品仅用于实验室检测,工业应用或者科学研究等非医疗目的,不可直接用于人类或动物的临床诊断治疗,非药用,非食用。购买者需具备相应的资质和存储,处置危险化学品的能力。

产品简介: 10×Western 转膜液可以用于Western 时湿法电转膜,使用前需配制成1×Western 转膜液。本转膜液不 含甲醇和SDS,无需调节pH 值。

使用方法(仅供参考):

一、1×Western 转膜液配制方法:

量取100 ml 10×Western 转膜液,然后按照下表配制1×Western 转膜液:

目的蛋白   添加剂
无水甲醇 SDS
变性蛋白

<20 kD 蛋白

20% 0.01%
20-80 kD 蛋白 10% 0.05%
>80 kD 蛋白 10%(NC 膜) 0.10%
0-5%(PVDF 膜)
非变性蛋白 <20 kD 蛋白 5-10% 0.01%
20-80 kD 蛋白 0-5% 0.05%
>80 kD 蛋白 0% 0.10%
加入超纯水,定容至1 L,无需调节pH,pH~8.3

注:甲醇和SDS 在转膜中有拮抗作用。甲醇使蛋白更加结合在膜上,而SDS 让蛋白更加离开膜。因此对大蛋白转膜来 说,多加SDS,少加甲醇;而对小蛋白转膜,多加甲醇,少加SDS。

二、转膜:

1、膜的选择:转膜可以选择PVDF 膜或NC 膜。根据蛋白大小选择膜的孔径。一般说来,大于20 kD 蛋白选择0.45 μm 孔径,低于20 kD 选择0.22 μm 孔径。PVDF 膜使用前需用无水甲醇润湿活化。

2、三明治结构:制作三明治时,将膜置于转膜夹芯正极一侧,凝胶置于转膜夹芯负极一侧,这样凝 胶上带负电荷的蛋白才能转移到膜上。蛋白转膜三明治结构如下: 负极(电转夹黑色面)-海绵垫-滤纸-凝胶-膜-滤纸-海绵垫-正极(电转夹白色面)

3、转膜条件:

以下转膜条件仅供参考,请根据目的蛋白确定最佳的转膜条件。

膜孔径 蛋白大小 温流 建议时间 降温措施
0.22um 低于20kd 200mA 30分钟 不需要
0.45um 20-50kd 300mA 45分钟 需要
0.45um 50-200kd 350mA 50分钟 需要
0.45um 高于200kd 350mA 2.5-4.5 小时 需要

注意事项:

1、转膜液如果颜色变成浅棕色或黄褐色,应丢弃。

2、1×Western 转膜液建议现用现配,不建议保存。

3、本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品。

4、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

保存条件: 常温保存,有效期两年。