ATP检测试剂盒(ATP Assay Kit)可以用于检测普通溶液、细胞或组织内的ATP(adenosine 5'-triphosphate)水平。
ATP,作为最重要的能量分子在细胞的各种生理、病理过程中起着重要作用。ATP水平的改变,会影响细胞的功能。通常细胞在凋亡、坏死或处于一些毒性状态下,ATP水平会下降,而高葡萄糖刺激等对于一些细胞可以上调细胞内ATP水平。通常ATP水平的下降表明线粒体的功能受损或下降,在细胞凋亡时ATP水平的下降通常和线粒体的膜电位下降同时发生。
样品制备非常简单。本试剂盒提供了可以用于细胞和组织裂解的ATP检测裂解液,简单裂解后即可用于ATP检测。无需进行高氯酸或三氯乙酸(TCA)抽提,或样品裂解后的煮沸等繁琐操作。
本试剂盒根据萤火虫萤光素酶(firefly luciferase,也称荧光素酶)催化萤光素产生萤光时需要ATP提供能量研制而成。当萤火虫萤光素酶和萤光素都过量时,在一定的浓度范围内荧光的产生和ATP的浓度成正比,这样就可以高灵敏地检测溶液中的ATP浓度。本试剂盒在样品体积为100微升时可以检测浓度低达5nM的ATP。而常规的细胞或组织裂解液中ATP的浓度仅为0.1-1μM,一些常见细胞的细胞内ATP水平约为10nmol/mg蛋白。并且本试剂盒的检测浓度范围非常大,检测上限可以高达10μM,并在10nM-10μM范围内可以形成良好的标准曲线。
使用本试剂盒中的ATP检测裂解液裂解获得的细胞或组织样品,不仅可以用于ATP检测,还可用于检测蛋白浓度、进行SDS-PAGE或一些常规的较易溶解蛋白的Western检测。
本试剂盒的使用方便快捷,通常10-20个样品可以在30-60分钟内测定完毕。
一个包装的本试剂盒至少可以检测200个样品。
保存条件:
-20℃保存,半年有效。-70℃保存,一年有效。ATP检测试剂需避光保存。
注意事项:
ATP检测试剂中含有萤光素酶,反复冻融会导致其逐渐失活。尽管经测试ATP检测试剂反复冻融5次对于其检测效果无明显影响,为取得较好的使用效果,建议用户使用时的冻融次数不宜超过3次。ATP检测试剂稀释成ATP检测工作液后,最好一次用完,不宜冻存后再使用。
ATP,特别是裂解后样品中的ATP在室温不太稳定,需在4℃或冰上操作。ATP在冰上可以稳定长达6小时。
本试剂盒需使用luminometer,即化学发光仪(检测萤光素酶报告基因时所用的仪器)。如果没有luminometer,也可以使用液闪仪。液闪仪的测定效果取决于液闪仪的检测灵敏度和检测精度。
使用可检测化学发光的多功能酶标仪时,推荐使用孔和孔之间不透光的96孔白板或黑板。如使用普通的透明96孔板,须特别注意在检测孔之间设置间隔孔,以减少邻近孔之间的相互干扰。对于透明96孔板,一个发光孔可以使上下或左右邻近孔的RLU值升高该孔的10-20%左右,使上下或左右间隔一个孔的邻近孔的RLU值升高该孔的1%-4%左右;对于相同的样品,底部不透光的96孔白板的化学发光读数可以达到透明96孔板的5-10倍左右,达到底部透光96孔白板读数的3倍左右(实测数据会因96孔板、检测仪器和样品等的不同而存在差异)。
本试剂盒提供的ATP检测裂解液可以有效裂解并释放常见的培养细胞和组织中的ATP。对于一些特殊的组织或样品,如果发现检测出来的ATP水平显著低于预期水平,可以在裂解样品后并且在离心前,取部分样品煮沸2分钟以充分释放ATP。煮沸后样品中的蛋白会变性,从而会在后续的离心步骤中被沉淀,因此煮沸的样品不能用于蛋白浓度测定、SDS-PAGE和Western检测。可以使用剩余的部分样品进行蛋白浓度测定、SDS-PAGE和Western检测。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作
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