G6PDH活性检测试剂盒(WST-8法) (G6PDH Activity Assay Kit with WST-8)是一种高灵敏度的基于WST-8的显色反应,通过比色法来检测细胞、组织或其它样品中G6PDH (glucose-6-phosphate dehydrogenase)酶活性的检测试剂盒。
WST-8是MTT的一种升级替代产品,和MTT或其他MTT类似产品如XTT、MTS等相比有明显的优点。首先,MTT被一些脱氢酶还原生成的formazan不是水溶性的,需要有特定的溶解液来溶解;而WST-8和XTT、MTS产生的formazan都是水溶性的,可以省去后续的溶解步骤。其次,WST-8产生的formazan比XTT和MTS产生的formazan更易溶解。再次,WST-8比XTT和MTS更加稳定,使实验结果更加稳定。另外,WST-8和MTT、XTT等相比,线性范围更宽,灵敏度更高。WST-8和WST-1相比,检测灵敏度更高,更易溶解,并且更加稳定。
本试剂盒使用便捷。使用细胞、组织等的裂解液即可进行检测,无需分离纯化细胞、组织或其它样品中的G6PDH。
本试剂盒检测灵敏度高,线性范围宽。可以每孔含量低至0.05mU的G6PDH,在1mU/ml (0.05mU/孔)至100mU/ml (5mU/孔)之间呈现良好的线性关系。
葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(glucose-6-phosphate dehydrogenase,简称G6PDH或G6PD)可催化葡萄糖-6-磷酸(glucose-6-phosphate,G6P)转化为6-磷酸葡萄糖酸内脂(6-phosphogluconate, 6-PG),这是磷酸戊糖途径(pentose phosphate pathway, PPP)的第一个步骤,也是该途径的限速步骤。磷酸戊糖途径对于NADPH (还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸,也称为还原型辅酶II)和戊糖的生成至关重要。NADPH对于通过GSH的再生来调控氧化还原平衡以及脂肪酸生物合成来说都至关重要。所以G6PDH的缺乏会导致由于不能生成NADPH而引起的一些疾病,如新生儿黄疸、非免疫性溶血性贫血等。
本试剂盒可检测样品中的G6PDH的酶活性,具体原理如下:G6P在G6PDH的作用下氧化生成6-PG,在这一反应过程中NADP+被还原为NADPH,生成的NADPH在电子耦合试剂1-mPMS (1-Methoxy-5-methylphenazinium Methyl Sulfate)的作用下将WST-8还原生成橙黄色的formazan,在450nm左右有最大吸收峰。反应体系中生成的formazan与样品中G6PDH的活性呈正比关系。WST-8法检测G6PDH的原理参考图1。
图1.WST-8法检测G6PDH酶活性的原理图。
本试剂盒适用于检测细胞、组织以及其它适当样品(如血液、血清)中的G6PDH活性。
本试剂盒可以测定100个样品。
保存条件:
-20℃保存,一年有效。
注意事项:
经检测本试剂盒中的G6PDH (细菌来源)室温存放72小时或反复冻融5次不影响其酶活性。但对于不同物种的G6PDH是否能耐受长时间的室温存放或反复冻融须自行测试,初次检测时尽量使用新鲜制备的样品。
由于G6PDH提取液本身略显粘稠,以该提取液作为稀释液时,无论对标准品还是样品进行稀释,在稀释过程中务必确保稀释均匀,否则易造成实验数据产生较大波动。
在样品加样和混匀过程中,须尽量避免产生气泡,以免影响最终的吸光度测定。
如果需要测定样品中G6PDH的绝对活力而又不能非常严格地控制反应温度和反应时间,则每次检测都需要设置标准曲线。
如果样品溶液中G6PDH活性过高或过低,不在试剂盒的线性检测范围内时,可适当调整样品或者提取液的用量。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。