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10×RealBLot快速转膜液

产品编号:A01811
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本网站销售的产品仅用于实验室检测,工业应用或者科学研究等非医疗目的,不可直接用于人类或动物的临床诊断治疗,非药用,非食用。购买者需具备相应的资质和存储,处置危险化学品的能力。

产品简介:

  快速转膜液使用独特配方,能高效快速地将蛋白转移到印迹膜(PVDF 膜或 NC 膜)上。使用湿转法(Tank blot)或半干转法(Semi-dry blot)方法,能在10-40 min 完成转膜过程。

  快速和环保:快速转膜液不使用甲醇,减轻了对实验者和环境的伤害。

  兼容性好:快速转膜液能兼容 Laemmli 胶,预制胶,Bis-Tris 胶等多种凝胶。

  转移效率高:快速转膜液对分子量跨度较大的蛋白也有很好的转移效率,有效解决了大小蛋白不能在同一张膜上同时 转移的问题。

使用说明:

转膜前的准备: 裁好的滤纸;裁好的转印膜;1×快速转膜液;无水甲醇(处理PVDF膜用);无水乙醇

一、湿转法(Tank blot):

1、按照下表配制 1×快速转膜液:

  1×快速转膜液配制量

100ml

500ml

1000ml

10×快速转膜液 10ml 50ml 100ml
无水乙醇 20ml 100ml 200ml
超纯水 70ml 350ml 700ml

2、将滤纸和海绵浸泡在1×快速转膜液中,完全浸湿,平衡 5 分钟。

3、 PVDF膜使用前要用无水甲醇润湿 30 秒,随后浸泡在1×快速转膜液中,完全浸湿平衡 5 分钟。

4、将凝胶在超纯水中浸泡漂洗 2 分钟,去除胶表面的SDS;随后将凝胶浸泡在 1×快速转膜液中。 注:水中漂洗时间一定不能超过 2 分钟,否则分子量较大的蛋白不能完全转移。

5、按照以下顺序做好转印三明治结构:

     负极(阴极)

     海绵

     滤纸

     凝胶

     转印膜

     滤纸

     海绵

     正极(阳极)

注:① 要彻底清除三明治结构中的气泡,适当补加 1×快速转膜液保持三明治结构湿润。

       ② 三明治结构太紧和太松都会影响转印效果。如果太紧,可以去除阳极一侧的海绵或滤纸。

6、将三明治结构放于转移槽中,转印槽中灌满1×快速转膜液。

7、湿转推荐使用恒流转移:

  恒电流 转移时间 降温措施
一张膜 375mA 35-40min 不需要
两张膜 375mA 35-40min 需要

二、半干转(Semi-dry blot):

1、按照下表配制 1×快速转膜液:

  1×快速转膜液配制量

100ml

500ml

1000ml

10×快速转膜液 10ml 50ml 100ml
无水乙醇 20ml 100ml 200ml
超纯水 70ml 350ml 700ml

2、将滤纸和海绵浸泡在 1×快速转膜液中,完全浸湿。

3、PVDF膜使用前要用无水甲醇润湿30秒,随后浸泡在1×快速转膜液中,完全浸湿,平衡 5 分钟。

4、将凝胶在超纯水中浸泡漂洗 2 分钟,去除胶表面的SDS;随后将凝胶浸泡在 1×快速转膜液中。

      注:水中漂洗时间一定不能超过 2 分钟,否则分子量较大的蛋白不能完全转移。

5、按照以下顺序做好转印三明治结构:

      负极(阴极)

      下层滤纸

      凝胶

      转印膜

     上层滤纸

     正极(阳极)

半干转时,滤纸、胶、膜之间的大小,一般是下层滤纸≥膜≥胶≥上层滤纸。上下两层滤纸一定不能接触;滤纸、胶、膜之间千万不能有气泡。接触的滤纸和气泡会造成短路。

6、半干转推荐使用恒压转移: 25 V,10-20 分钟。

注意事项:

  为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

保存条件:

  4℃贮存,一年有效。常温运输。